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开物荧光定量PCR仪校准管理手册：光路与温控校准

文章来源：宏微量子发布时间：2026-11-11 10:17:36

引言

qPCR的准确性由两条线支撑：温度是否准，荧光是否稳。温度偏差会改变扩增效率，光路漂移会影响Ct值。校准管理就是把这两条线定期拉回基准，并留下可查的记录。

本文说明内部核查与外部校准的区别、温控与光路的核查方法、周期安排与档案要求。

核心要点速览

1. 建议每年一次外部校准，装机、搬迁、大修后追加。

2. 温度核查按JJF1527-2015执行，覆盖50℃、72℃、95℃。

3. 光路核查用标准荧光板或已知样本，观察Ct与荧光强度是否漂移。

4. 校准记录含日期、机构、依据、测点、结果与处置意见。

内部核查与外部计量区别

项目	内部核查	外部校准
执行主体	实验室人员	具备资质的计量机构
依据	企业方案与说明书	JJF1527-2015
输出	核查记录	校准证书
周期	每季度或每半年	每年一次
作用	发现漂移、决定是否送检	出具法定效力数据

注：内部核查不能替代法定校准。

标准化校准操作流程

温度部分：设备预热30分钟，环境温度稳定，按孔位布点多点温度探头，分别设定50℃、72℃、95℃各保持5分钟，记录稳定段数据，计算准确性与均匀性。

光路部分：使用标准荧光板或已知Ct值的质控样本，按四通道分别采集，比较荧光强度与Ct值相对基线的偏移；通道间做串扰比对。

性能部分：用梯度稀释标准品建立标准曲线，记录斜率、R²与扩增效率，确认定量能力未下降。

记录：填写校准记录表，注明设备编号、探头或标准品编号、环境条件、测点与结论。

校准结果处置与档案管理

合格：继续使用，记录归档。接近限值：缩短核查周期，检查环境与光路清洁度。超差：停止用于关键检测，联系厂家检修并重新校准，修复后用质控样本确认性能。

档案包含设备台账、校准计划、校准证书、内部核查记录、维修记录与质控趋势表，保存期限按实验室管理要求执行。

常见问题解答

qPCR仪多久校准一次？

建议每年一次外部校准；装机、搬迁、大修或出现Ct异常漂移后追加；日常可每季度做内部核查。

自己校准和送检有什么区别？

自校是内部核查，用于判断是否漂移；送检由计量机构按JJF1527-2015执行并出具证书，具备对外证明效力。

校准步骤有哪些？

温度核查、光路核查、标准曲线验证、记录归档四步；温度与光路应分别判定。

需要准备什么标准物质？

多点温度探头与采集仪、标准荧光板或已知质控样本、梯度稀释标准品、记录表单。

校准管理总结

把每次校准的Ct均值、荧光强度与温度偏差记在同一张趋势表上，就能提前发现光路衰减与温控漂移。对qPCR而言，趋势比单次证书更能反映设备状态。

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